Klasterlangan muntazam ravishda intervalgacha qisqa palindromik takrorlashlar (CRISPR) - bu yuqori samarali natijalari bilan dunyoda inqilob qilgan uchinchi avlod genom tahrirlash texnikasi. U turli xil biologik kasalliklar va infeksiyalarni davolash uchun ishlatilgan. Turli bakteriyalar va boshqa prokaryotlar (masalan, arxeyalar) ham faglardan himoya qilish uchun CRISPR/Cas9 tizimlariga ega. CRISPR/Cas9 asosidagi strategiyalar potentsial o'zgargan qarshilik genlari, transkripsiya va epigenetik regulyatsiyani nishonga olish orqali uch karra salbiy ko'krak bezi saratonining (TNBC) o'sishi va rivojlanishini inhibe qilishi mumkinligi haqida xabar berilgan. Ushbu terapevtik aralashuvlar hatto TNBCda ham kuzatiladigan dori qarshiligi kabi qiyin muammolarni hal qilishga yordam berishi mumkin. Hozirgi vaqtda CRISPR/Cas9 ni maqsadli hujayralarga yetkazib berish uchun turli xil usullar qo'llaniladi, masalan, jismoniy (mikroinjektsiya, elektroporatsiya va gidrodinamik rejimlar), virusli (adeno bilan bog'liq virus va lentivirus) va virussiz (liposomalar va lipid nanopartikullari). )-zarrachalar). TNBC ning molekulyar sabablarini o'rganish uchun turli modellar ishlab chiqilgan bo'lsa-da, in vivo genomni tahrirlash vositalarini yetkazib berishning sezgir va maqsadli usullarining yo'qligi ularning klinik qo'llanilishini cheklaydi. Xulosa qilib aytganda, ushbu sharh mavjud dalillarga asoslanib, TNBC uchun CRISPR/Cas9 davolashning rivojlanishi, qiyinchiliklari, cheklovlari va istiqbollarini har tomonlama o'rganadi. Shuningdek, biz sun'iy intellekt va mashinani o'rganishning kombinatsiyasi TNBC ni davolashda CRISPR/Cas9 strategiyalarini qanday yaxshilashi mumkinligini ta'kidlaymiz.
Saraton nazoratsiz hujayra bo'linishi, hujayra siklini nazorat qilish punktlarining buzilishi va o'sma bostiruvchi genlardagi (TSG) mutatsiyalar bilan tavsiflanadi (Matthews va boshqalar, 2022). Saratonning turli turlari orasida ko'krak bezi saratoni ayollarda eng keng tarqalgan saraton turi bo'lib, butun dunyo bo'ylab yuqori o'lim darajasiga ega (Waks va Winer, 2019). Ko'krak bezi saratoni gistologik va biologik xususiyatlar, klinik ko'rinish va xulq-atvor hamda davolanishga javob kabi turli xil xususiyatlarga ega bo'lgan heterojen kasallikdir (Weigelt va boshqalar, 2010). Ko'krak bezi saratonini tasniflash ko'krak bezi saratonini tashxislash va o'sma prognozi uchun aniq tushuncha beradi. Umumiy biomarkerlar va klinikopatologik xususiyatlardan foydalanish ko'krak bezi saratonini tasniflashning asosiy mezoni bo'lib kelgan (Tsang va Tse, 2019). Ko'krak bezi saratonini prognoz qilish va davolashga javob berishga ko'plab omillar, jumladan, estrogen retseptorlari (ER), progesteron retseptorlari (PR), inson epidermal o'sish omili retseptorlari 2 (HER2/neu) ning mavjudligi va gistologik daraja, o'sma turi va darajasi ta'sir qiladi. limfa tugunlarining hajmi va metastazi (Al-Tubaiti, 2020). Ko'krak bezi saratonining beshta ichki molekulyar kichik turi aniqlangan, jumladan, luminal A, luminal B, HER2 bilan boyitilgan, bazal-o'xshash va klaudin-past (Prat va boshqalar, 2015). TNBC - bu barcha ER, PR va HER2 ni ifoda etmaydigan saratonning molekulyar kichik turi (Yin va boshqalar, 2020). Bu patologik xususiyatlar TNBC bilan bog'liq bo'lib, uning tez rivojlanishini va boshqa har qanday ko'krak bezi saratoniga qaraganda ko'proq tajovuzkor tabiatini tasdiqlaydi (Feng va boshqalar, 2018). Bundan tashqari, Peru va boshqalar (2000) ko'krak bezi saratonini qayta tasniflash va ko'krak bezi saratonining beshta ichki kichik turini aniqlash uchun mikroarray texnologiyasidan foydalanganlar (Cadenas, 2012). Bazal-o'xshash ko'krak bezi saratoni - bu uch karra salbiy fenotipga ega bo'lgan va tez rivojlanishi bilan bog'liq bo'lgan ko'krak bezi saratonining kichik turi. Shuni ta'kidlash kerakki, barcha bazal ko'krak saratoni odatda noto'g'ri TNBC tashxisi qo'yiladi, ammo faqat 77% TNBC hisoblanadi; Aksincha, TNBC ning 71–91% bazal ko'krak saratoniga o'xshaydi, bu esa bu ikki turdagi ko'krak saratoni bir-biriga mos kelishini va turli tasniflarni ifodalashini ko'rsatadi (Wang D.-Y. va boshqalar, 2019). Bu prognozni aniqlash va hozirgi va kelajakdagi davolash usullariga potentsial javoblarni aniqlash uchun TNBC ning heterojenligini tavsiflash zaruratini tug'diradi. Bundan tashqari, TNBC barcha ko'krak saratoni holatlarining 15–20% ni tashkil qiladi va 50 yoshgacha bo'lgan ayollarda ko'proq uchraydi. BRCA1 yoki BRCA2 mutatsiyalari TNBC holatlarining taxminan 20% da qayd etilgan (Xie va boshqalar, 2017; Tzikas va boshqalar, 2017). , 2020). Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, TNBC o'ziga xos immun mikro muhitiga ega, bu qon tomir endotelial o'sish omillari, o'sma bilan bog'liq makrofaglar (TAM), o'sma infiltratsiya qiluvchi limfotsitlar (TIL) va o'sma o'sishi va migratsiyasida ishtirok etadigan boshqa molekulalarning yuqori darajasini o'z ichiga oladi. Shuning uchun, TNBC mikro muhitini tushunish uning prognozi va davolash uchun juda muhimdir (Fan va He, 2022).
TNBC prognozini baholash va samarali davolanishni ta'minlash uchun asosan ER, PR va HER2 ni aniqlash uchun immunohistokimyoviy (IHC) va ko'krak neoplazmalarini aniqlash uchun mammografiyaga asoslangan aniq tashxis qo'yish muhimdir. Biroq, mammografiya nekroz va fibroz kabi o'sma ichidagi xususiyatlarni yetarlicha tasvirlay olmaydi (Deepak Singh va boshqalar, 2021). Yomon prognoz va tashxis shifokorlarga to'g'ri dori-darmonlarni buyurishga to'sqinlik qilganligi sababli (Chaudhary, 2020), TNBC bilan og'rigan bemorlarga yordamni yaxshilash uchun turli strategiyalar qo'llaniladi. Hozirgi vaqtda TNBC bilan og'rigan bemorlarda ikkita dori, doksorubitsin va siklofosfamid qo'llaniladi va yaxshi natijalarni ko'rsatdi. Bundan tashqari, karboplatin va sisplatin kabi boshqa platina preparatlari qo'llaniladi (Sikov va boshqalar, 2015). Bundan tashqari, Olaparib, Velaparib va PF-01367338 kabi PARP ingibitorlari TNBC ni davolash uchun potentsial kimyoterapiya preparatlari sifatida ishlatilgan (Ishino va boshqalar, 2018). Wnt/b-Catenin, NOTCH va Hedgehog signalizatsiya yo'llari TNBC ning paydo bo'lishi va rivojlanishida ishtirok etishi haqida xabar berilganligi sababli, ushbu yo'llarga dorilarni yo'naltirish muhim strategiya bo'lishi mumkin (Aysola va boshqalar, 2013). Bugungi kunda jarrohlik, nur terapiyasi va kimyoterapiya TNBC ni davolashning asosiy yo'nalishi bo'lib qolsa-da, maqsadli terapiya, immunoterapiya, Cas9n, dCas9 kabi turli xil CRISPR bilan bog'liq genlarni tahrirlash vositalari, CRISPR/Cas12, asosiy tahrirlash va CRISPR/Cas9 ga qaratilgan gen terapiyasi kabi yangi davolash usullarini ishlab chiqishda sezilarli yutuqlarga erishildi. Bu yerda biz TNBC ni davolashda qo'llaniladigan turli xil CRISPR bilan bog'liq genlarni tahrirlash vositalariga e'tibor qaratamiz. Ular orasida CRISPR/Cas9 keng e'tiborga sazovor bo'ldi.
Cas9n, shuningdek, Cas9 nikaza nomi bilan ham tanilgan, CRISPR/Cas9 genom tahrirlash tizimidan olingan Cas9 oqsilining genetik jihatdan modifikatsiyalangan variantidir (Gupta va boshqalar, 2019). Asl shaklida Cas9 oqsili ikkita nukleaza domenini o'z ichiga oladi: RuvC va HNH, ularning asosiy vazifasi ikkala DNK zanjirining ajralishi. Biroq, Cas9n da nukleaza domenlaridan biri HNH genetik mutatsiyaga uchraydi va faol bo'lmaydi. Shuning uchun Cas9n ning HNH domeni ishlamaydi. Faqat RuvC domeni faol bo'lib qoladi, bu Cas9n ga bitta DNK zanjirlarida uzilishlarni kesish yoki yaratish imkonini beradi (Trevino va Zhang, 2014). Cas9 bilan taqqoslaganda, Cas9n maqsaddan tashqari ta'sirlarni samarali ravishda kamaytirishi va hujayralarni tiklash mexanizmlarini aniq yaxshilashi mumkin. Cas9n turli muammolarni, masalan, ikki zanjirli DNKda ma'lum joylarda uzilishlar yaratish uchun ishlatilishi mumkin. Shu maqsadda ikkita Cas9n molekulasi birlashtirildi va birgalikda ishlatildi (Yee, 2016). Aralash liniya kinazasi 3 (MLK3) - bu TNBC metastazi paytida asosiy regulyator bo'lib xizmat qiladigan mitogen bilan faollashtirilgan protein kinazasi (Cronan va boshqalar, 2012).
MLK3 TNBC metastaziga olib keladigan bir nechta signalizatsiya yo'llarini faollashtirishi mumkin. Masalan, c-Jun N-terminal kinaz (JNK) yo'li hujayra harakatchanligini va hujayradan tashqari matritsa degradatsiyasini tartibga soladi va MLK3 JNK yo'lini faollashtiradi, shu bilan hujayra harakatchanligini oshiradi va invaziv xususiyatlarni beradi (Rattanasinchai va Gallo, 2016). MLK3 shuningdek, EMTni ham tartibga soladi. Buning uchun u Snail, Slug va Twist kabi transkripsiya omillarini faollashtiradi. Bu omillar epitelial markerlarning ifodalanishini inhibe qiladi va mezenximal markerlarning ifodalanishini rag'batlantiradi, bu esa metastatik fenotipning paydo bo'lishiga olib keladi (Casalino va boshqalar, 2023). MLK3 ning ECMni qayta qurish va ECMni degradatsiya qiluvchi matritsa metalloproteinazalari (MMP) kabi proteazalarni faollashtirishda rol o'ynashi kuzatilgan. Bu o'sma hujayralarining invaziyasini va uzoq joylarga tarqalishini osonlashtiradi (Katari va boshqalar, 2019). Shunday qilib, avvalgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, MLK3 TNBCda muhim rol o'ynaydi. Rattanasinchai va Gallo MLK3 ning rolini o'rganish uchun TNBC modellaridan foydalanishdi va uning ma'lum signalizatsiya yo'llari orqali saraton rivojlanishini rag'batlantirishini aniqladilar. Ular MLK3 ni tahrirlash uchun CRISPR/Cas9n dan foydalanishdi va TNBC metastazining sezilarli darajada kamayganini kuzatdilar (Rattanasinchai va Gallo, 2016).
Ko'pincha inaktiv Cas9 deb ataladigan dCas9 Cas9 oqsilining modifikatsiyalangan hosilasidir. Faol Cas9 dan farqli o'laroq, dCas9 endonukleaza faolligiga ega emas, bu esa DNKning ikki zanjirli uzilishlarini keltirib chiqara olmaydi. Shuning uchun, dCas9 dan DNK ketma-ketligida hech qanday o'zgarish yoki modifikatsiyasiz genomning ma'lum mintaqalarini aniq nishonga olish uchun foydalanish mumkin (Wang va boshqalar, 2016). dCas9 da ikkita endonukleaza oqsili, RuvC va HNH, muhim aminokislota qoldiqlarini bostirish orqali inaktivatsiya qilinadi. (Richter va boshqalar, 2016). DNK parchalanish faolligining yo'qligiga qaramay, dCas9 genetik tadqiqotlar va biotexnologiyada bir qator muhim rol o'ynaydi. Masalan, u genomning ma'lum mintaqalarini vizualizatsiya qilish imkonini beradi, transkripsiyani tartibga solishni osonlashtiradi va epigenetik modifikatsiyalarni rag'batlantiradi (Brocken va boshqalar, 2018).
Transkripsiya faktori ZEB1 (rux barmoq E-qutisini bog'laydigan gomeoboks 1) epitelial-mezenximal o'tish (EMT) vositasida o'ziga xos va muhim rol o'ynaydi, bu embrional rivojlanish, to'qimalarni tiklash va saraton rivojlanishi paytida sodir bo'ladigan hujayra jarayonidir. Bu epitelial hujayralarning mezenximal hujayralarga aylanishini o'z ichiga oladi, natijada hujayra morfologiyasi, harakatchanligi, invazivligi va boshqalarda o'zgarishlar bo'ladi (Wu va boshqalar, 2020). ZEB1 TNBCda epitelial hujayralarning hujayra-hujayra adgeziyasi va qutblanishini saqlab qolish uchun mas'ul bo'lgan E-kadherin va Okludin kabi bir nechta epitelial markerlarni inhibe qiladi (Moreno-Bueno va boshqalar, 2008). Bundan tashqari, ZEB1 N-kadherin, vimentin va fibronektin kabi ba'zi markerlarni faollashtiradi (Konradi va boshqalar, 2014) va shuningdek, Rho GTPazalari va matritsa metalloproteinazalari (MMPs) kabi sitoskelet remodelatsiyasida ishtirok etadigan genlarni boshqaradi (Huang). va boshqalar, 2014). 2022), bundan tashqari, u turli xil signalizatsiya yo'llariga, masalan, transformatsion o'sish omili-β (TGF-β), Wnt signalizatsiyasi va boshqalarga ta'sir qiladi va shu bilan TNBCda o'sma invaziyasi va metastazini rag'batlantiradi (Chen va boshqalar, 2016). Ko'plab tadqiqotlar va ilmiy dalillar ZEB1 ning TNBC ni aniqlash va terapevtik aralashuv uchun qimmatli vosita sifatida katta salohiyatga ega ekanligini ko'rsatadi. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqotda Waryah va boshqalar TNBC modelidan foydalangan va dCas9 tomonidan ZEB1 ni to'liq bostirishga erishgan. Shunday qilib, ular in vivo sharoitida juda yuqori o'ziga xoslik va ZEB1 ning deyarli to'liq inhibisyonini kuzatdilar (Waryah va boshqalar, 2023).
CRISPR/Cas12 - bu CRISPR/Cpf1 deb nomlangan gen tahrirlash vositasi. U CRISPR/Cas tizimidan olingan bo'lib, bu yerda Cas12 atamasi Cas9 ga mutlaqo o'xshash bo'lgan CRISPR bilan bog'liq 12 oqsilini anglatadi (Bharathkumar va boshqalar, 2022). Faqatgina farq shundaki, u Cas12 oqsilini o'z ichiga oladi. Cas9 bilan taqqoslaganda, Cas12 gen tahrirlash jarayonida yopishqoq uchlarni hosil qilish kabi ba'zi noyob funktsiyalarga ega, Cas9 esa to'mtoq uchlarni hosil qiladi (Wang va boshqalar, 2021). Cas12 ning bu xususiyati uning o'ziga xos DNK manipulyatsiyasi texnologiyasiga hissa qo'shadi. Nishon DNKni aniq tanib olish va kesishga qodir oqsil sifatida u g'ayrioddiy ko'p qirrali xususiyatga ega bo'lib, uni gen tahrirlash kabi turli xil ilovalar uchun samarali vositaga aylantiradi (Pickar-Oliver va Gersbach, 2019).
Boshqa CRISPR variantlariga o'xshab, CRISPR/Cas12 ham TNBCdagi genlarni nokaut qilish yoki faollashtirishga qodir, bu uning patogenezida yoki davolashga javobida muhim rol o'ynaydigan genlarni nishonga oladi (Yang va Zhang, 2023). Ushbu jarayonni amalga oshirish uchun Cas12 ni maqsadli genga yo'naltiruvchi yo'naltiruvchi RNK (gRNK) ishlab chiqildi. Cas12 o'z maqsadiga bog'langandan so'ng, u DNKda ikki qatorli uzilishlarni kiritadi va DNKni tiklash mexanizmlarini faollashtiradi. Ta'mirlash jarayonida noto'g'ri nukleotidlar kiritilishi mumkin, bu esa gen mutatsiyalariga va funktsiyaning yo'qolishiga olib keladi (Zhang va boshqalar, 2021a). Bundan tashqari, genlarni faollashtirish uchun Cas12 fermentining takomillashtirilgan versiyasi (dCas12 deb ataladi) ham ishlatilgan. Uni transkripsiya aktivatori bilan birlashtirish orqali ma'lum genlarni qo'zg'atish va shu bilan ularni faollashtirish mumkin. Ushbu texnologiya o'sma bostiruvchi genlarni faollashtirishda katta salohiyatga ega (Sultan va boshqalar, 2022).
Prime editing - bu yangi ishlab chiqilgan va nihoyatda yuqori darajadagi genomni tahrirlash texnologiyasi. U organizmning DNKsini juda aniq o'zgartirishga qodir (Chen va Liu, 2023). Prime editing ikkita asosiy komponentning integratsiyasi orqali amalga oshiriladi: modifikatsiyalangan CRISPR/Cas9 fermenti va teskari transkriptaza. CRISPR/Cas9 fermentining roli genomdagi aniq joylarni tanlab nishonga olishdir, teskari transkriptaza esa DNKni maqsadli joyda to'liq o'zgartirishga yordam beradi (Hassan va boshqalar, 2021). Prime editing mexanizmida birinchi qadam prime editing qo'llanmasi RNK (pegRNA) ni yaratishni o'z ichiga oladi (Standage-Beier va boshqalar, 2021). Unda maqsadli DNKdagi kerakli tahrirlash joyiga mos keladigan maqsadli ketma-ketlik va RNK shabloni mavjud. Keyin pegRNA maqsadli hujayralarga prime editing nukleazasi (PE2) bilan birga kiritiladi. PE2 - bu Cas9 fermenti, teskari transkriptaza va prime editing adapteridan iborat termoyadroviy oqsil (Martín-Alonso va boshqalar, 2021). Hujayra ichida pegRNA va PE2 komplekslari o'zgartirmoqchi bo'lgan aniq DNKni qidiradi. Cas9 fermenti DNKni kesib, bitta zanjirlardan iborat shablon yaratadi (Choi va boshqalar, 2022). Teskari transkriptaza ushbu shablondan DNKni tahrirlashga tayyorlash uchun foydalanadi. DNKni nusxalash bilan bir qatorda, RNK shablonini tahrirlash bo'yicha ko'rsatmalar ham kiritilgan. Nihoyat, yangi yaratilgan DNK zanjiri DNKdagi uzilishlarni tuzatish uchun shablon sifatida ishlatiladi, natijada kerakli modifikatsiyani o'z ichiga olgan o'zgartirilgan DNK ketma-ketligi hosil bo'ladi (Ochoa-Sanchez va boshqalar, 2021). Primer tahrirlash mexanizmlari genlarda keng tarqalgan mutatsiyalarga olib kelishi mumkin. U nuqta mutatsiyalarini, qo'shimchalarni, o'chirishlarni va hatto genlarni almashtirishni nishonga olishi mumkin (Anzalone va boshqalar, 2019; Chen va Liu, 2023). Primer tahrirlash avvalgi genom tahrirlash texnologiyalariga nisbatan bir qator afzalliklarni taqdim etadi. Bularga aniqlikning oshishi, maqsaddan tashqari ta'sirlarning kamayishi va DNKning ikki zanjirli uzilishlariga tayanmasdan DNKni tahrirlash imkoniyati kiradi (Anzalone va boshqalar, 2020).
CRISPR/Cas9 texnologiyasi dastlab bakteriyalarni plazmidlar o'tkazilishi va fag infektsiyasidan himoya qilish uchun ishlab chiqilgan va keyinchalik genomni tahrirlash uchun samarali RNKga asoslangan DNKni nishonga olish vositasi sifatida qayta ishlatilgan (Jiang va Doudna, 2017). Bundan tashqari, CRISPR/Cas9 tizimi mos ravishda bakterial va arxaik genomlarning 50% va 87% da mavjudligi haqida xabar berilgan (Ishino va boshqalar, 2018). CRISPR/Cas9 in vivo va in vitro rejimlaridan foydalangan holda har qanday g'ayritabiiy genetik ketma-ketlikni o'chirish, kiritish va tuzatish uchun potentsial vositadir (Sabit va boshqalar, 2021). Bundan tashqari, CRISPR/Cas9 qiziqish uyg'otadigan maqsadli genlar uchun o'ziga xosligi tufayli adaptiv immun tizimining bir qismi ekanligi ko'rsatilgan (Chen va Zhang, 2018).
CRISPR/Cas9 Cas9 va bitta yo'naltiruvchi RNK (sgRNA) dan iborat. Cas9 bir nechta oqsil komponentlaridan tashkil topgan endonukleazadir. Bundan tashqari, Cas9 noyob strukturaviy va konformatsion xususiyatlarga ega (Pacesa va boshqalar, 2022), chunki u ikkita lobdan iborat: aniqlash (REC) va nukleaza (NUC). REC lob yana uchta mintaqaga bo'linadi: REC1, REC2 va ko'prik spirallari (Cromwell va boshqalar, 2018). NUC uchta lobdan iborat, ya'ni RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH va protospacer qo'shni motif (PAM) o'zaro ta'sir domeni (1-rasm) (Song va boshqalar, 2016). sgRNA ikkita komponentdan iborat, jumladan, CRISPR RNK (crRNA) va transkodlovchi kichik RNK (izlovchi RNK) (1-rasm). sgRNA Cas9 oqsilini konneksinlarga bog'lab, faol kompleks hosil qiladi, bu effektor kompleksi sifatida ham tanilgan (Richter va boshqalar, 2012). crRNA maqsadli DNK ketma-ketliklarini aniqlashda muhim rol o'ynaydigan 18-20 nukleotid asos juftligidir. Bundan tashqari, crRNA maqsadli DNK bilan juftlashadi va tracrRNA Cas9 nukleazasi uchun maqsadli DNKga bog'lanish uchun asos bo'lib xizmat qiladi (Manghwar va boshqalar, 2019). Boshqa tomondan, PAM ketma-ketligida 3 ta nukleotid mavjud bo'lib, bu effektor kompleksining DNKga bog'lanishini tasdiqlaydi, belgilaydi va vositachilik qiladi. Cas9 oqsil kompleksi bo'linmalari RuvC va HNH katalitik faollikka ega (Richter va boshqalar, 2012; Asmamaw va Zawdie, 2021). Cas9 bo'linmasining HNH nukleaza domeni crRNA bilan bog'liq DNK zanjirini ajratadi. RuvC nukleaza domeni boshqa DNK zanjirlarini uzib, ikki zanjirli uzilishlarni (DSB) hosil qiladi, shundan so'ng ikki xil DNK uzilishining tiklanish mexanizmi faollashadi (Jiang va Doudna, 2017) (1-rasm).
1-rasm. CRISPR/Cas9 ga umumiy nuqtai nazar (A). CRISPR/Cas9 tizimining tarkibiy qismlari: (i). Cas9 endonukleazasi maqsadli DNK ketma-ketligini kesish, (ii) crRNA va tra-crRNA ximeralarining birlashishi natijasida hosil bo'lgan bitta yo'naltiruvchi (sg) RNK uchun javobgardir. (ikkita). Cas9 tarkibiga Rec I, Rec II, NUC lob (HNH va Ruv C kichik komponentlar) va mos keladigan funktsiyalarga ega PAM o'zaro ta'sir domeni (C) kabi bir nechta komponentlar kiradi. CRISPR/Cas9 oqsil kompleksi DNK ketma-ketliklarini komplementar bo'lmagan va komplementar shakllarga ajratadi (D). CRISPR/Cas9 genomni uch bosqichda tahrirlaydi: aniqlash, kesish va ta'mirlash. Loyihalashtirilgan sg-RNK Cas9 ni boshqaradi va kerakli ketma-ketlikni komplementar komponent crRNA orqali taniydi. Cas9 PAM ketma-ketligini 5′-NGG-3′ da taniydi va DNKni eritib, DNK-RNK gibridini hosil qiladi va bo'linishni faollashtiradi. Cas9 ning HNH domeni komplementar zanjirni, RuvC domeni esa komplementar bo'lmagan zanjirni ajratadi. CRISPR/Cas9 dsDNKni ikki usulda parchalash orqali tiklaydi: gomologik bo'lmagan uchli birikma (NHEJ) va gomologiyaga yo'naltirilgan ta'mirlash (HDR). NHEJ begona gomologik DNK bo'lmaganda ikki qatorli DNKni fermentativ jarayon orqali tiklaydi, bu tasodifiy DNK ketma-ketliklarini kiritishi yoki olib tashlashi mumkin bo'lgan xatoga moyil mexanizmdir. HDR juda o'ziga xos va gomologik DNK shablonlarini talab qiladi.
CRISPR/Cas9 vositachiligidagi ta'mirlash yo'llari gomologik bo'lmagan uchli qo'shilish (NHEJ) va gomologiyaga yo'naltirilgan ta'mirlash (HDR) mexanizmlarini o'z ichiga oladi. NHEJ xatoga moyil yo'ldir, chunki u qo'shish yoki o'chirishni o'z ichiga oladi va ta'mirlash mexanizmi davomida hech qanday naqshni talab qilmaydi. U standart oqsillarni yaratish uchun tasodifiy nukleotidlardan foydalanadi (Abbasi va boshqalar, 2021). Ushbu ta'mirlash tizimi KU kompleksi, o'zaro komplementatsiya qiluvchi oqsil kompleksi 4-turi (XRCC-4), DNK uchini qayta ishlash fermenti va protein kinazasi DNK-PKcs kabi to'rtta kompleksdan iborat (Abbasi va boshqalar, 2021). KU kompleks oqsili ikkita kichik birlikka, Ku 70 va Ku 80 ga ega va NHEJ mexanizmida muhim rol o'ynaydi, chunki ta'mirlash mexanizmi ikkita kichik birlikning (Ku 70 va Ku 80) maqsadli DNKning to'mtoq yoki deyarli to'mtoq uchlariga bog'lanishi bilan boshlanadi (Abbasi va boshqalar, 2021), bu esa shikastlanish joyiga boshqa NHEJ bilan bog'liq omillarni jalb qilish uchun asos bo'lib xizmat qiladi (Yang va boshqalar, 2020). XRCC-4 va DNK ligazasi mos ravishda 334 va 911 aminokislotalardan iborat va XRCC4-DNK ligaza IV kompleksi DNK uchlarining bog'lanishini rag'batlantiradi (Chatterjee va boshqalar, 2015). DNK uchini qayta ishlash fermenti, shuningdek, polinukleotid kinaz 3′-fosfat deb ham ataladi, DNK uchini qayta ishlash fermentidir. U DSB ta'mirlash paytida DNKdagi 3′P guruhini olib tashlashi va 5′OH guruhini fosforillashi mumkin. Bu shuningdek, SSB ta'mirlash yo'li yordamida bitta zanjirli uzilishlarni (SSB) ta'mirlashni ham o'z ichiga oladi (Chatterjee va boshqalar, 2015). Protein kinaza DNK-PKcs - bu PIKKlarning (fosfatidilinozitol 3-kinaza bilan bog'liq kinazalar) va mutatsiyaga uchragan ataksiya telangiektaziya (ATM) oilasining katalitik subbirligidan, shuningdek, ATM va Rad3 bilan bog'liq ATRlardan iborat DNKga bog'liq protein kinaza. Tarmoqli uzilishlar (DSB) va bitta zanjirli uzilishlar (Yue va boshqalar, 2020; Peng va boshqalar, 2016).
HDR aniqroq va mosroq ta'mirlash mexanizmi hisoblanadi, chunki ma'lumot gomologik DNK dupleksining butun shakli yordamida ko'chiriladi, garchi u opa-singil xromatidlarining mavjudligini talab qilsa ham. Bu sutemizuvchilar hujayra siklining S/G2 bosqichida sodir bo'ladi. HDR asosan xamirturush turlarida uchraydi, ammo NHEJ sutemizuvchilarda juda muhimdir (Burma va boshqalar, 2006; Abbasi va boshqalar, 2021). To'liq ta'mirlash mexanizmi 1-rasmda ko'rsatilgan.
TNBC genetik va epigenetik anomaliyalar tufayli yuzaga kelganligi sababli, CRISPR/Cas9 yordamida malign genomik/epigenomik anomaliyalarni tuzatish oqilona terapevtik yondashuv bo'lishi mumkin (Chen va boshqalar, 2019). Bundan tashqari, hujayraga xos transkripsiyani tartibga solishda ishtirok etadigan ba'zi transkripsiya omillari saraton hujayralarining noyob xususiyatlarini namoyish qilishi mumkin, bu transkripsiyani tartibga solish saraton kasalligini davolash uchun ajoyib yondashuv bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi (Drost va boshqalar, 2017). Dori vositalarini ishlab chiqish uchun o'smalarning ushbu molekulyar xususiyatlaridan, masalan, genetik, epigenetik va transkripsiya nuqsonlaridan foydalanish klinik natijalarni yaxshilashi va skrining xarajatlarini kamaytirishi mumkin. CRISPR nafaqat saratonga olib keladigan genomik nishonlarni aniqlash va aniqlashga qodir, balki inson hujayralarida onkogenlarni tahrirlash, bostirish va epigenetik jihatdan o'zgartirish uchun ham ishlatilishi mumkin bo'lgan potentsial gen tahrirlash vositasidir (1-jadval) (Ahmed va boshqalar, 2021). O'sma bostiruvchilari, onkogenlar va dori qarshiligi bilan bog'liq genlarni qidirish uchun bir nechta CRISPR tekshiruvlari o'tkazildi. Turli TNBC onkogenlarini tahrirlash uchun CRISPR/Cas9 dan foydalanish 2-rasmda ko'rsatilgan.
2-rasm. CRISPR/Cas9 yordamida turli TNBC onkogenlarining genlarini tahrirlash, natijada o'sma o'sishi va metastazining kamayishi kuzatiladi. Bu onkogenlar qatoriga CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 va CXCR7, Crypto1, ROR1 va ST8SIA kiradi, ular TNBC ning paydo bo'lishi va metastazida ishtirok etadi.
Saraton hujayralari migratsiyasi, invaziyasi va epitelial-mezenximal o'tish (EMT) ITGA9 bilan bog'liq. Avvalgi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ITGA9 Notch yo'lida asosiy rol o'ynaydi va rabdomiosarkoma metastazida qiziqarli rol o'ynaydi (Molist va boshqalar, 2020). Bundan tashqari, ITGA9 ko'krak bezi saratoni kabi bir nechta o'sma turlarida bemorlarning prognozi bilan chambarchas bog'liqligi aniqlandi (Wang Z. va boshqalar, 2019). Bundan tashqari, ITGA9 ning bioinformatik tahlili shuni ko'rsatdiki, uning TNBCdagi ifodasi boshqa ko'krak bezi saratoni subtiplariga qaraganda ancha yuqori edi. ITGA9 darajasining oshishi TNBC bemorlarida o'sma metastazi va qaytalanishi bilan bog'liq. CRISPR/Cas9 tomonidan ITGA9 ning nokaut qilinishi saraton ildiz hujayralari (CSC) ga o'xshash xususiyatlarga, o'sma angiogeneziga, o'sma o'sishiga va TNBCda β-katenin degradatsiyasini rag'batlantirish orqali metastazning kamayishiga olib keldi (Wang Z. va boshqalar, 2019).
Kripto-1 TGF-β oilasining a'zosi bo'lib, erta embriogenez, ildiz hujayralarini saqlab qolish va saraton metastazlari uchun juda muhimdir (Ishii va boshqalar, 2021). Tdgf-1 nomi bilan ham tanilgan bu onkogen GPI bilan bog'langan signalizatsiya oqsili bo'lib, ibtidoiy chiziq, mezoderma va endodermaning shakllanishini tartibga solishda, shuningdek, embriogenez paytida tana organlarining rivojlanishida chap/o'ng assimetriyani o'rnatishda ishtirok etadi (Zhang va boshqalar, 2021b). Bundan tashqari, Kripto-1 ildiz hujayrasi markeri sifatida epitelial-mezenximal o'tishda (EMT) ishtirok etishi ko'rsatilgan (Zhang va boshqalar, 2021b). EMT nafaqat embrional rivojlanish, fibroz va yaralarni davolash kabi turli jarayonlar uchun, balki saraton invaziyasi va metastaz uchun ham juda muhimdir. Bundan tashqari, Kripto-1 to'rtta Notch retseptorlari bilan o'zaro ta'sir qilishi va ularning translyatsiyadan keyingi yetilishini kuchaytirishi ko'rsatilgan (Brandstadter va Maillard, 2019). Notch signalizatsiya yo'li inson ko'krak bezi saraton hujayralarini saqlab qolishda ishtirok etishi ma'lum. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, Crypto-1 ning CRISPR/Cas9 vositachiligida nokaut qilinishi saraton o'sishi va metastazini bostiradi. Shuning uchun, Crypto-1 TNBC uchun muhim terapevtik nishonga aylanishi mumkin (Castro va boshqalar, 2015).
XCL12 oqsili va uning xemokin retseptorlari CXC (CXCR4 va CXCR7) saraton hujayralarining ko'payishi, o'sishi, migratsiyasi va invaziyasida turli rol o'ynaydi (Wu va boshqalar, 2015). Ushbu xemoretseptorlar in vivo va in vitro modellarida bir nechta signalizatsiya yo'llari orqali TNBC rivojlanishi bilan bog'liq (Wu va boshqalar, 2015). Bundan tashqari, CXCR4 va CXCR7 ning faollashishi TNBC da metastazga ko'proq moyillik va yomon prognoz bilan bog'liq (Karn va boshqalar, 2022). Shuning uchun, CXCR4 va CXCR7 ning nokaut qilinishi TNBC ni o'z ichiga olgan ko'krak bezi saratonini davolash uchun samarali dori nishon genlariga aylanishi mumkin. Yang va boshqalar tomonidan o'tkazilgan tadqiqot. Yang va boshqalar (2019) CXCR4 va CXCR7 genlarini birgalikda nokaut qilish uchun CRISPR/Cas9 dan foydalangan va TNBC proliferatsiyasi, o'sishi, migratsiyasi va invaziyasi sezilarli darajada inhibe qilinganligini aniqlagan (Yang va boshqalar, 2019).
Ko'krak bezi saratoni to'qimalarida TNBC onkogeni bo'lgan miR-3662 darajasining oshishi kuzatildi (Yi va boshqalar, 2022). miR-3662 ning nokautlanishi ko'krak bezi saratoni o'smasining o'sishi va metastazini ham in vivo, ham in vitro sharoitida inhibe qilishi ko'rsatilgan (Agarwal va Gupta, 2021). HBP-1 Wnt/-katenin signalizatsiyasining kuchli inhibitori bo'lib, ehtimol TNBC hujayralarining miR-3662 vositachiligidagi o'sishi uchun javobgardir. Yaqinda Yi va boshqalar miR-3662-HBP1 o'qi TNBC hujayralarida Wnt/-katenin signalizatsiya yo'lini tartibga solishini aniqladilar (Yi va boshqalar, 2022). O'simtaga xos ifodasi tufayli miR-3662 TNBC uchun potentsial terapevtik nishon bo'lishi mumkin. Shunday qilib, miR-3662 ning CRISPR/Cas9 vositachiligida nokaut qilinishi TNBC ni davolash uchun yangi dorilarni ishlab chiqish uchun ajoyib yondashuv bo'lishi mumkin.
UBR5 - bu turli xil saraton kasalliklarida o'sma paydo bo'lishi, metastaz va immun javobining asosiy regulyatori sifatida aniqlangan 300 kDa nukleofosfoprotein (Shearer va boshqalar, 2015; Fu va boshqalar, 2023). UBR5 ning TNBC namunalarida yuqori darajada regulyatsiya qilinganligi va ubiquitin ligaza faolligi orqali proliferatsiyani qo'zg'atish orqali ERα funktsiyasini rag'batlantirishi haqida xabar berilgan (Bolt va boshqalar, 2015). Birlamchi TNBC namunalarining butun ekzom ketma-ketlik tadqiqotlari ham UBR5 ning ekspressiyasining oshganligini ko'rsatdi, bu uning TNBC rivojlanishidagi rolini ko'rsatadi. Bundan tashqari, UBR5 ning CRISPR/Cas9 tomonidan olib tashlanishi eksperimental sichqon modellarida TNBC metastazi va o'sishining sezilarli darajada inhibisyonini ko'rsatdi. Bundan tashqari, UBR5 ning yovvoyi tipdagi sichqon modeliga kiritilishi uning to'liq funksiyasini tikladi, bu ta'sir inaktiv mutant shtammlarda kuzatilmadi (Liao va boshqalar, 2017). UBR5 ning yetishmasligi TNBCda apoptozning kuchayishi, nekroz va angiogenezning sustligi tufayli o'sma o'sishining inhibatsiyasi bilan bog'liq. UBR5 ning yo'qolishi tufayli o'smaning uzoq organlarga tarqalishi kamayadi va UBR5 asosan E-kadherin ekspressiyasini kamaytirish orqali g'ayritabiiy EMT ni keltirib chiqaradi (Zhang va Weinberg, 2018). Yaqinda UBR5 TNBCda IFN-γ tomonidan qo'zg'atilgan PDL1 transkripsiyasida E3 ubikvitinatsiya faolligining yo'qligi sababli juda muhim omil ekanligi ko'rsatildi. RNK transkriptom tahlili shuni ko'rsatdiki, UBR5 IFN-γ yo'li bilan bog'liq genlarga tizimli ta'sir ko'rsatishi va protein kinaz RNK (PKR) va uning signal transduserlari va aktivatorlarining faollashuv darajasini oshirish orqali PDL1 transaktivatsiyasini rag'batlantirishi mumkin. transkripsiya 1 (STAT1) va interferon regulyator omili 1 (IRF1). Biroq, CRISPR/Cas9 vositachiligida UBR5 va PD-L1 ekspressiyasining kombinatsiyalangan ablatsiyasi har ikkala blokadaning o'ziga qaraganda sinergik terapevtik ta'sirga ega bo'lib, o'sma mikromuhitiga chuqur ta'sir ko'rsatadi (Wu va boshqalar, 2022). Shunday qilib, CRISPR/Cas9 UBR5 funktsiyasini inhibe qilish, shu bilan TNBC metastazini va o'sma o'sishini bostirish uchun muhim vosita bo'lishi mumkin.
ROR1 - bu saraton va embrional rivojlanish davrida ifodalanadigan va onkofetal oqsil sifatida aniqlangan I turdagi transmembran oqsili (Nicholas Borcherding, 2014). Turli xil inson saraton kasalliklarining invaziv xatti-harakati ROR1 ning yuqori regulyatsiyasi bilan bog'liq. ROR1 ni nishonga oluvchi terapevtik birikmalarni o'z ichiga olgan in vivo va in vitro tadqiqotlardan istiqbolli natijalar olindi (Chien va boshqalar, 2016). Ko'krak to'qimasi biopsiyalarida ROR1 mRNK ning yuqori darajasi agressiv bazal o'xshash ko'krak (BL) o'smalari va ularning tananing boshqa qismlariga ko'chishi bilan ham bog'liq. Bundan tashqari, ROR1 ning haddan tashqari ifodalanishi TNBC rivojlanishining prognostik belgisi sifatida aniqlangan (Chien va boshqalar, 2016). Biroq, TNBC o'sishi va metastazini bostirish uchun CRISPR/Cas9 yordamida ROR1 ni susaytirish samarali strategiya bo'ladi.
Sialillanish jarayoni glikokonjugatlarga sial kislotasini qo'shishni o'z ichiga oladi, bu esa sialiltransferazalar (ST) tomonidan katalizlanadi. ST8SIA1 ST oilasiga tegishli va limfotsitik leykemiya va kolorektal saraton kabi turli kasalliklarning patogenezida muhim rol o'ynaydi (Chang va boshqalar, 2018). RNK ketma-ketligi tahlili shuni ko'rsatadiki, ST8SIA1 TNBC bemorlarining ko'krak to'qimasida yuqori darajada ifodalanadi va o'sma bostiruvchi gen p53 mutatsiyalari bilan ijobiy bog'liq bo'lib, bu TNBC patogeneziga hissa qo'shishi mumkin (Battula va boshqalar, 2017). Bundan tashqari, ST8SIA1 TNBC metastazi va qaytalanishida ishtirok etadi, bu uning TNBC paydo bo'lishi va rivojlanishida muhim rol o'ynashini ko'rsatadi. TNBC ning in vitro modelida CRIPSR/Cas9 tomonidan ST8SIA1 ni nokdaun qilish o'sish va metastazni bloklashi ko'rsatilgan (Battula va boshqalar, 2017). Bu shuni ko'rsatadiki, CRISPR/Cas9 TNBC ni davolashda ST8SIA1 onkogenining funktsiyasini inhibe qilish uchun muhim vosita bo'lishi mumkin.
NAT1 II faza ksenobiotik birikmalarining shakllanishini katalizlovchi metabolik ferment bo'lib, deyarli barcha inson to'qimalarida ifodalanadi. NAT1 aromatik amin substrati bo'lmagan taqdirda ham asetil-KoA (atsetil-KoA) ni nishonga olish uchun kofaktor folatdan foydalanishi mumkin (Stepp va boshqalar, 2015; Laurieri va boshqalar, 2014). Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, NAT1 ko'krak bezi saratoni hujayralari modellarida matritsa metalloproteinaza 9 (MMP9) funktsiyasini tartibga soladi va glyukoza ochligi paytida reaktiv kislorod turlaridan (ROS) himoya qiladi (Wang va boshqalar, 2018). NAT1 ni olib tashlash piruvat dehidrogenaza kompleksini inhibe qilishi, bu esa mitoxondrial disfunktsiyaga olib kelishi ko'rsatilgan (Wang L. va boshqalar, 2019). Bundan tashqari, boshqa turli xil ma'ruzalar shuni ko'rsatdiki, kichik molekulalar va siRNA susaytirish yordamida NAT1 ni inhibe qilish ko'krak bezi saratoni hujayralarining invazivligi va ko'payishini kamaytirishi mumkin (Stepp va boshqalar, 2018). Yaqinda CRISPR/Cas9 ko'krak bezi saratoni hujayralari liniyasi MDA-MB-231 da NAT1 ni bostirish uchun ishlatildi, bu uning ifoda darajasiga qarab hujayra metabolizmiga ta'sir qiladi. Ushbu tadqiqot shuningdek, NAT-1 TNBC ning rivojlanishi va metastazi uchun juda muhimligini ko'rsatdi (Carlisle va boshqalar, 2020).
Onkogenlarning muvofiqlashtirilgan transkripsiyasi super kuchaytirgichlar, transkripsiya omillari va kofaktorlar tomonidan tartibga solinadi (Hnisz va boshqalar, 2015). Bundan tashqari, transkripsiyani tartibga solish uchun CDK7, CDK8, CDK9, CDK12 va CDK13 kabi siklinga bog'liq kinazalar (CDK) guruhi talab qilinadi. Ular orasida CDK7 RNK polimeraza II ning fosforillanishida ishtirok etadi, bu TNBC patogenezida onkogen transkripsiyasini boshlash va kengaytirish uchun juda muhimdir. Muhim tadqiqotda CRISPR/Cas9 tomonidan CDK7 ning o'chirilishi TNBC ni inhibe qildi, bu TNBC patogenezi CDK7 ga bog'liqligini ko'rsatadi (Wang Y. va boshqalar, 2015).
Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, MYC va RBP (RNK bog'lovchi oqsil) mutatsiyalari apoptozga olib kelishi mumkin, MYC yoki RBP dagi bitta gen mutatsiyalari esa saraton hujayralarining o'sishiga ta'sir qilmaydi (Einstein va boshqalar, 2021). Inson genomidagi 1000 dan ortiq RBPlar CRISPR/Cas9 asosidagi kutubxona yordamida tekshirildi. Ular orasida 57 ta RBP MYC darajasi yuqori bo'lgan saraton hujayralarining o'sishi uchun juda muhim ekanligi aniqlandi (Wheeler va boshqalar, 2020). Bundan tashqari, YTHDF2 TNBC hujayralarining o'sishini saqlab qolish uchun muhimdir va MYC ifodasi yuqori bo'lgan saraton hujayralarida yuqori darajadagi transkripsiya va tarjima paytida metillangan transkriptlar miqdorini kamaytiradi. Bundan tashqari, YTHDF2 saraton hujayralari uchun muhim emas, ular TNBC bemorlarining omon qolishini uzaytirish uchun MYC darajasining yuqori bo'lishiga kamroq bog'liq (Einstein va boshqalar, 2021), bu TNBC ni yengib o'tadigan dorilar uchun potentsial terapevtik nishon bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.
Sink barmoq oqsillari (ZNF) inson genomining taxminan 1% ni tashkil qiladi. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, ZNF jigar saratoni, ko'krak saratoni va yo'g'on ichak saratoni kabi turli saraton kasalliklarida hujayralar ko'payishini tartibga solishi mumkin (Zhang W. va boshqalar, 2021; Li va boshqalar, 2017). CRISPR nokauti natijasida yaratilgan kutubxonalar ko'krak saratoni hujayralarida turli o'sma bostiruvchi genlarni (TSG) skrining qilish uchun ishlatilgan (Shalem va boshqalar, 2014). O'shandan beri CRISPR/Cas9 ZNF319 tomonidan o'chirilgan ko'krak saratoni hujayralarining transkriptomik tadqiqoti shuni ko'rsatdiki, ZNF319 ko'krak saratoni ko'payishini kamaytiradigan o'sma bostiruvchi geni bo'lib, shuning uchun turli xil potentsial signalizatsiya mexanizmlari va boshqa biologik funktsiyalarda ishtirok etadi (Wang L. va boshqalar, 2022).
Ferroptoz - bu temirning mavjudligiga bog'liq bo'lgan dasturlashtirilgan hujayra o'limining bir turi. Ferroptozning rivojlanishiga lipid peroksidlarining mavjudligi ta'sir qilishi ma'lum. Bundan tashqari, PKCβII ning erta lipid peroksidlanishini namoyon qilishi va lipid peroksidlanishining ortishi ferroptoz bilan bog'liqligi haqida xabar berilgan. CRISPR/Cas9 vositachiligidagi kinaz ingibitorlari kutubxonasini skrining qilish PKCβII ning MDA-MB-231 hujayralarida ferroptoz uchun juda muhim bo'lgan lipid peroksidlanishi jarayonida ishtirok etishini aniqladi (Zhang va boshqalar, 2022). Shuning uchun, bu CRISPR/Cas9 tomonidan PKCβII ning nokaut qilinishi ferroptoz bilan bog'liq kasalliklarni davolash uchun potentsial o'sma bostiruvchi gen nishoni bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi (Zhang va boshqalar, 2022).
Dori vositalariga chidamlilik saraton kasalligi bilan og'rigan bemorlarda o'limning taxminan 90% ni tashkil qiladi deb ishoniladi va bu saraton kasalligini davolashdagi asosiy muammolardan biridir (Bukowski va boshqalar, 2020). Natijalar shuni ko'rsatadiki, dori vositalarining chiqib ketishi, DNKni tiklash, apoptoz va turli hujayra signalizatsiya yo'llari bilan bog'liq yetarli miqdordagi genlar dori vositalariga chidamlilik bilan bog'liq (Haider va boshqalar, 2020). Ular orasida bir nechta genlar CRISPR/Cas9 vositalari tomonidan nishonga olingan va dori vositalariga chidamlilikni kamaytirish va saratonga qarshi davolash usullarining samaradorligini oshirishda istiqbolli natijalarni ko'rsatgan (Vaghari-Tabari va boshqalar, 2022). Bundan tashqari, yuqori samarali CRISPR/Cas9 genlarini nokaut skrining kutubxonalari potentsial dori vositalariga chidamlilik genlari nishonlarining funktsiyasini o'zgartirishda ishtirok etgan (Shalem va boshqalar, 2015). Paklitakselga chidamlilik genlarini aniqlash uchun, genom bo'ylab sgRNA kutubxonasi skriningi bilan birgalikda RNK ketma-ketligi qo'llanildi, bu esa takroriy TNBC bilan og'rigan bemorlarda dori qarshiligi bilan bog'liq bo'lgan giston deatsetilaza 9 (HDAC9) ni o'z ichiga olgan sakkizta nomzod genni aniqlash uchun qo'llanildi (B va boshqalar, 2020). Boshqa bir tadqiqotda, saratonga qarshi dorilar bilan davolangan TNBC bemorlarining omon qolish davrida diserin/treonin va tirozin protein kinazasi (DSTYK) ning ekspressiyasining ortishi kuzatildi. Bundan tashqari, DSTYK ning CRISPR/Cas9 vositachiligida nokaut qilinishi in vitro sharoitida dori qarshiligi yuqori bo'lgan saraton hujayralarining apoptozini (SUM102PT hujayralari va MDA-MB-468 hujayralari) va in vivo TNBC modelini sezilarli darajada oshirdi (Ogbu va boshqalar, 2021).
TNBC MAPK yo'lining g'ayritabiiy faollashuviga ega bo'lsa-da, MEK-nishonlangan terapiyalarning klinik ta'siri sust. CRISPR/Cas9 genomik kutubxonasi skriningi shuni ko'rsatdiki, PSMG2 (proteom yig'ish chaperon 2) ning inhibatsiyasi TNBC BT549 va MB468 hujayralarini MEK inhibitori AZD6244 ga sezgir qiladi. PSMG2 ning CRISPR/Cas9 nokauti normal proteasoma funktsiyasini o'zgartirdi, bu PDPK1 ning avtofagiya vositasida parchalanishiga olib keldi va shu bilan AZD6244 (MEK inhibitori) va MG132 (proteasoma inhibitori) tomonidan qo'zg'atilgan TNBC sichqon modellarida o'sma hujayralarini yanada yaxshiladi. Shunday qilib, proteasoma va MAP kinaz (MEK) ingibitorlari o'sma hujayralarining ko'payishini kamaytirish uchun sinergik ravishda qo'llanilishi mumkin (Wang X. va boshqalar, 2022).
CRISPR/Cas9 shuningdek, TNBC qarshiligiga olib keladigan gen funktsiyasining yo'qolishini skrining qilish uchun ham ishlatilgan (Shu va boshqalar, 2020). Ge va boshqalar TNBCda BET bromdomin inhibitori (BBDI) bo'lgan JQ1 bilan davolangan saraton hujayralarining dori qarshiligi mexanizmini tushuntirdilar. CRISPR/Cas9 dan foydalanib, ular rb1 genini o'chirish TNBC ning saratonga qarshi JQ1 preparatiga chidamli bo'lishiga olib kelganini aniqladilar. Shuning uchun, rb1 funktsiyasi TNBCda JQ1 dorilariga javoban muhim ahamiyatga ega. Ular shuningdek, paklitaksel CDK4/6 kinaz/mikrotubula inhibitori ekanligini va uning JQ1 kabi BBDI bilan kombinatsiyasi dori-darmonga chidamli TNBC ga istiqbolli terapevtik javoblarni berishi mumkinligini xabar qilishdi (Ge va boshqalar, 2020).
Uzoq kodlamaydigan RNK (lncRNA) ning transkripsiya landshafti TNBCda neoadjuvant terapiyaga chidamlilik uchun javobgar ekanligi haqida xabar berilgan. Ushbu tadqiqot shuni ko'rsatadiki, besh xil MALAT1 lncRNA transkriptlari TNBCda yuqori darajada ifodalanadi. Bundan tashqari, MALAT1 ning CRISPR/Cas9 vositachiligidagi o'chirilishi TNBC BT-549 hujayralarining paklitaksel va doksorubitsinga sezgirligini oshirdi, bu esa TNBCda MALAT1 qarshiligining potentsial rolini ko'rsatadi (Shaath va boshqalar, 2021).
BRCA1 (BRCA1m) mutatsiyalari heterojen va shuning uchun ularni aniqlash qiyin. BRCA1 ning sintetik halokatli hamkori bo'lgan PARP1 (poli(ADP-riboza) polimeraza) ni nishonga olish TNBC dori kemosensitivligini oshirishi mumkin. CRISPR/Cas9 dan foydalanib, PARP1 ni o'chirish doksorubitsin, gemsitabin va dotsetaksel kabi saratonga qarshi dorilarning mBRCA1 mutant TNBC hujayralariga sezgirligini oshirdi, bu esa PARP1 ning TNBC da dori qarshiligida ham ishtirok etishini ko'rsatadi (Vaghari-Tabari va boshqalar, 2022). . BRCA1 yoki BRCA2 o'sma bostiruvchi genlaridagi mutatsiyalar odamlarda ko'krak bezi saratoni rivojlanish ehtimolini oshirishi ma'lum. Ushbu bemorlarni davolash PARP ingibitorlaridan foydalanishni talab qiladi. Bundan tashqari, CRISPR/Cas9 yordamida nukleotidni qutqarish omili DNPH1 ni nokaut qilish toksik nukleotid 5-gidroksimetildeoksiuridin (hmdU) monofosfatni olib tashlashi va shu bilan BRCA yetishmaydigan hujayralarning PARP inhibitorlariga sezgirligiga javobini kuchaytirishi ko'rsatildi (Fugger). va boshqalar, 2021). Shunday qilib, CRISPR/Cas9 va PARP1 inhibitorlari TNBC uchun muhim davolash strategiyasiga aylanishi mumkin.
Penetrant glikoprotein (P-gp) geni ko'p dori-darmonlarga chidamlilik geni bo'lib, odatda barcha TNBClarning taxminan 41 foizida yuqori darajada regulyatsiya qilinadi (Sun va boshqalar, 2020). P-gp tomonidan qo'zg'atilgan dori oqimi ko'krak bezi saratonida dori-darmonlarga chidamlilikning asosiy regulyatori sifatida aniqlangan. P-gp ingibitorlari ko'krak bezi saratonida saratonga qarshi dorilarga yuqori sezuvchanlikni ko'rsatdi (Famta va boshqalar, 2021). Shunday qilib, CRISPR/Cas9 vositasida P-gp va P-gp ingibitorlarini ablasyon yoki bostirish TNBCda dori-darmonlarga chidamlilikni yengishning juda muhim usullari bo'lishi mumkin.
ATP bilan bog'lovchi kassetali tashuvchi G2 (ABCG2) TNBCda dori qarshiligini keltirib chiqarishi ma'lum (Palasuberniam va boshqalar, 2015), ammo hozirda CRISPR/Cas9 va ABCG2 ning sustlashishi va o'sma bostiruvchi genining inaktivatsiyasi o'rtasidagi bog'liqlik haqida hech qanday ma'lumot yo'q. PTEN ABCG2 faollashuvini kuchaytirishi mumkin (Palasuberniam va boshqalar, 2015), (Deepak Singh va boshqalar, 2021). Shuning uchun, ABCG2 ni olib tashlash uchun CRISP/Ca9 dan foydalanish va uni ABCG2 inhibitori bilan birlashtirish TNBCda dori qarshiligini yengish uchun mos davolash usuli bo'lishi mumkin. 2-jadvalda CRISPR/Cas9 barcha qarshilik genlarini nishonga olishi haqida so'z boradi.
2-jadval. CRISPR/Cas9 hujayralarni saratonga qarshi dorilarga sezgirlashtirish uchun turli TNBC qarshilik genlarini nishonga oladi.
CRISPR/Cas9 kutubxonalari saraton patogenezi bilan bog'liq gen mutatsiyalarini skrining qilish uchun potentsial vositalardir (Chan va boshqalar, 2022). Ushbu skrining usuli (a) kutubxonani qurish, (b) lentivirus transduksiyasi, (c) fenotipik skrining va (d) maqsadli gen tahlili kabi to'rtta bosqichni o'z ichiga oladi. TNBC da MAPK yo'lining g'ayritabiiy faollashuvi mavjud bo'lsa-da, PTEN, RB1 va TP53 kabi o'sma bostiruvchi genlarda mutatsiyalarga ega bo'lgan TNBC bemorlari uchun MEK maqsadli terapiyasining klinik prognozi juda yomon.
Bundan tashqari, CRISPR/Cas9 yordamida gen nokaut skriningi Gvatemala gul va barg ekstraktlarida ko'p bo'lgan eng kuchli va selektiv molekula, dehidrokatrolni sinovdan o'tkazdi, bu dehidrokatrolning MDA-MB-231 ga ta'sirini tushunish uchun. Selektiv hujayra sitotoksikligi mexanizmlari. TNBC subtiplarining mezenximal ildiz xususiyatlari. Ushbu CRISPR/Cas9 asosidagi skrining shuningdek, 17β-gidroksisteroid dehidrogenaza 11 turini kodlovchi gen HSD17B11 MDA-MB-231 hujayralarida yuqori darajada ifodalanganligini va MDA-MB-231 hujayralari uchun xos bo'lgan dehidrofalkarinolga olib kelishini aniqladi (Grant va boshqalar, 2020). Shunday qilib, bu CRISPR/Cas9 genomik skriningi potentsial tabiiy birikmalarning saratonga qarshi xususiyatlarining asosiy mexanizmlarini aniqlashda katta salohiyatga ega ekanligini ko'rsatadi.
Bundan tashqari, TNBC ning saratonga moyilligi onkogen va o'smani bostiruvchi yo'llar o'rtasidagi bog'liqlikni ko'rsatuvchi xolis genom bo'yicha in vivo CRISPR/Cas9 skriningi yordamida o'rganildi. mTOR va Hippo yo'llarining asosiy komponentlari TNBC da o'smani tartibga solishda muhim rol o'ynashi haqida xabar berilgan. Bundan tashqari, tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, mTORC1/2 va YAP onkoproteinining farmakologik inhibisyoni in vitro dori-matritsa sinergiyasi modeli va in vivo bemor tomonidan olingan ksenograftlar yordamida TNBC patogenligini samarali ravishda inhibe qiladi. Bundan tashqari, Torin-1 vositachiligidagi mTORC1/2 inhibisyoni makropinositozni kuchaytiradi, verteporfin tomonidan qo'zg'atilgan YAP inhibisyoni esa TNBC hujayralarining o'limiga olib keladi. Birgalikda, bu natijalar TNBC uchun yangi va samarali davolash usullarini aniqlash uchun genom bo'yicha in vivo CRISPR skriningining kuchi va mustahkamligini ta'kidlaydi (Dai va boshqalar, 2021).
Immun tizimining buzilishi o'sma paydo bo'lishida muhim omil hisoblanadi. Saraton hujayralari himoya mexanizmlarini chetlab o'tib, shu jumladan o'sma mikromuhitida immun hujayralarining faolligiga aralashish va immunitet tizimini buzish orqali immunitetni yo'qotishdan qochadi. Shuning uchun, yaxshilangan immunitet tizimini rivojlantirish o'smalarga qarshi kurashishning asosiy yondashuvi bo'lishi mumkin. CRISPR/Cas9 asosidagi gen modifikatsiyasidan foydalanish immunitet disfunktsiyasi bilan bog'liq bir nechta muammolarni turli nuqtai nazardan hal qiladi. CRISPR/Cas9 ko'krak bezi saratoniga qarshi o'smalarga qarshi immunitetni quyidagi yo'llar orqali yaxshilash uchun ishlatilgan (3-rasm).
3-rasm. CRISPR/Cas9 immunoterapiyasi TNBC hujayralarini nishonga oladi. CDK5 ning yo'qolishi va PDL1 va CD155 ning nokaut qilinishi immunitet tizimini kuchaytiradi. Xuddi shunday, A2AR ning yo'qolishi va HER2, mucin 1 va TEM8 kabi TAA larning nokaut qilinishi CAR-T hujayralarining saraton hujayralarini o'ldirishdagi samaradorligini oshirdi. CRISPR/Cas9 tomonidan boshqariladigan T hujayralari skriningi shuni ko'rsatdiki, p38 kinazasining buzilishi T hujayralarining o'smaga qarshi faolligini oshiradi. CRISPR/Cas9 tomonidan modifikatsiyalangan T hujayralari TCR (T hujayra retseptorlari) ifodasini oshiradi, natijada T hujayralari o'smaga qarshi faollikka ega bo'ladi.
Immunoterapiyaning maqsadi immunitet tizimini saraton hujayralariga hujum qilishga undashdir. Immun nazorat nuqtasi oqsillarining haddan tashqari ifodalanishi odatda otoimmun reaksiyalarning oldini oladi, ammo saraton kasalligining oldini olishga yordam berishi mumkin (Topalian va boshqalar, 2015). Bu oqsillar immun hujayralari yuzasidagi retseptorlarga bog'lanish orqali immun reaksiyalarining oldini oladi. Bir nechta nazorat nuqtasi oqsillari (masalan, CD155 va PD-L1) immun hujayralaridagi PD-1 retseptorini nishonga oladi va ko'krak bezi saratonida, ayniqsa TNBCda ifodalanadi (Li Y.-C. va boshqalar, 2020). CRISPR/Cas9 yordamida PD-L1 yoki uning retseptorini nokaut qilish immunitet tizimini TNBC o'smalariga hujum qilishga undashi mumkin (Yahata va boshqalar, 2019). Bundan tashqari, CDK5 ning CRISPR/Cas9 vositachiligidagi o'chirilishi orqali PD-L1 ifodasini pasaytirish in vitro va in vivo sharoitida o'sma o'sishini inhibe qilishi ko'rsatilgan (Deng va boshqalar, 2020). Ko'krak bezi saratonining in vitro va in vivo modellarida o'sishning inhibatsiyasi CD155 ning shRNA vositachiligida kamayishi ko'krak bezi saratoniga terapevtik ta'sir ko'rsatishi mumkinligini ko'rsatadi (Gao va boshqalar, 2018).
CAR T hujayralari o'sma bilan bog'liq antigenlarni (TAA) taniydigan va ularning faolligini oshirish uchun nazorat nuqtasi oqsillarini nokaut qilishdan foydalanishi mumkin bo'lgan CARlarni ifodalaydi (Li C. va boshqalar, 2020). Ko'krak bezi saratonida CAR T hujayralarini davolash uchun turli xil potentsial nishonlar mavjud, jumladan, HER2, mucin1 va TEM8 kabi bir nechta TAA (Bajgain va boshqalar, 2018). Mezotelinni nishonga olgan CAR T hujayralari (TNBC BT-459 hujayralarida haddan tashqari ifodalangan) CRISPR/Cas9 yordamida PD-1 nokaut qilinganda saratonga qarshi samaraliroq ekanligi haqida dalillar mavjud (Hu va boshqalar, 2019). Biroq, bemorlardan T hujayralarini ajratib olish va keyin ularni ex vivo tahrirlash mehnat talab qiladigan va vaqt talab qiladigan jarayondir. Universal T hujayralari izolyatsiya talablarini kamaytirishi mumkin bo'lsa-da, transplantatsiya-xo'jayinga qarshi anomaliyalarning oldini olish uchun inson leykotsit antigeni (HLA) I sinf va T hujayra retseptorini (TCR) ifodalovchi donor T hujayralari olib tashlanishi kerak (Ren va boshqalar, 2017). , 2017a). CRISPR/Cas9 dan foydalanib, HDR bir vaqtning o'zida TCR va HLA ni yo'q qilishi va CAR ni kodlovchi genni yo'q qilishi mumkin. Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, CRISPR/Cas9 dan TCR lokusiga anti-CD19 CAR larni kiritish va shu bilan T hujayralarini yo'q qilmasdan CAR larni samarali ishlab chiqarish uchun foydalanish mumkin (Dimitri va boshqalar, 2022). Multipleks texnologiyalari TCR, beta-2-mikroglobulin (B2M), HLA-I subunit va PD-1 va CTLA-4 kabi boshqa oqsillarni bir vaqtning o'zida yo'q qilish orqali allogenik CAR T hujayralarini yaratish uchun ishlab chiqilgan, ular TNBC ga qarshi ko'proq saratonga qarshi xususiyatlarga ega bo'lishi mumkin (Eyquem va boshqalar, 2017; Liu va boshqalar, 2017; Ren va boshqalar, 2017b; Dimitri va boshqalar, 2022).
CRISPR/Cas9 dan foydalanish CAR-T hujayralarining samaradorligini oshirishi mumkin. Adenozin immunosupressiv xususiyatlarga ega ekanligi ma'lum va T hujayralari funktsiyasini blokirovka qilish va adenozin A2A retseptorlarini (A2AR) faollashtirish orqali saratonga qarshi immunitetni kamaytirishi mumkin (Vigano va boshqalar, 2019). CRISPR/Cas9 yordamida A2AR ni o'chirish in vivo CAR-T hujayralarining samaradorligini sezilarli darajada oshirdi (Giuffrida va boshqalar, 2021). T hujayralari hujayra kengayishi, differentsiatsiya, oksidlovchi stress va genomik stress kabi turli fenotipik xususiyatlarni namoyon qilishi ma'lum. CRISPR/Cas9 asosidagi T hujayralari skriningi 25 xil T hujayra retseptorlari kinazalarining buzilishini aniqladi. Ular orasida p38 kinazaning o'chirilishi T hujayralarining o'smalarga qarshi faolligini oshirishi ko'rsatilgan, bu p38 kinaza CAR-T hujayralarini boshqarishning asosiy regulyatori ekanligini ko'rsatadi (Gurusamy va boshqalar, 2020).
T hujayralarini yuqori darajada ifodalangan TCRlarni ishlab chiqarish uchun CRISPR/Cas9 yordamida genetik modifikatsiyalash mumkin. Genetik modifikatsiyalangan T hujayralarini bemorlarga o'tkazish endogen T hujayralariga qaraganda kuchliroq saratonga qarshi faollikni ko'rsatdi. Shuning uchun, endogen TCRlar bemorlarda genetik modifikatsiyalangan TCRlar bilan raqobatlashishi mumkin, bu esa saraton immunoterapiyasining potentsialiga ta'sir qilishi mumkin. Ushbu muammoni hal qilish uchun, CRISPR/Cas9 yordamida qabul qiluvchi hujayralardagi endogen TCR-β ni olib tashlash va keyinchalik TCR-β T hujayralarini saraton bemorlariga o'tkazish endogen TCR jinsiy raqobatiga ehtiyoj sezmasdan saratonga qarshi yaxshiroq immun javoblarini namoyish qilishi mumkin (Fan va boshqalar, 2018). Shunday qilib, CRISPR tomonidan modifikatsiyalangan T hujayralari bundan mustasno, TCRlar oddiy TCR tomonidan transduksiyalangan T hujayralariga qaraganda o'sma antigenlariga ming marta sezgirroqdir. Bundan tashqari, turli leykemiyalarda γδ TCR+ CRISPR tomonidan hosil qilingan o'zgartirilgan T hujayralari standart TCR o'tkazilishiga qaraganda CD4+ va CD8+ T hujayralarining yuqori ifodasini namoyish etadi (Legut va boshqalar, 2018). Shunday qilib, CRISPR/Cas9 tomonidan yaratilgan modifikatsiyalangan T hujayralari TNBCni yengish uchun samarali immunoterapiya usuli bo'lishi mumkin.
Integrinlar hujayra transmembranlarida mavjud bo'lgan va hujayralarning hujayradan tashqari matritsaga (ECM) bog'lanishini rag'batlantiradigan hujayra adgeziyasi molekulalari (Hamidi va Ivaska, 2018). Integrinlarning disregulyatsiyasi hujayradan tashqari matritsani o'zgartirish orqali saraton rivojlanishi va migratsiyasi bilan bog'liq bo'lib, bu qon aylanishida saraton hujayralarining omon qolishiga olib keladi (Hamidi va Ivaska, 2018). CRISPR/Cas9 vositachiligidagi integrin nokauti TNBCda o'sma rivojlanishini, metastazni va kolonizatsiyani sekinlashtiradi. Integrin a5 (ITGA5) ning nokauti o'pka saratoni kabi boshqa saraton kasalliklarida hujayra migratsiyasi va rivojlanishini kamaytirishi haqida xabar berilgan (Ju va boshqalar, 2017), bu integrin a5 ham TNBC patogenezida asosiy omil bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.
An'anaviy embrion ildiz hujayralari (ES) usullaridan foydalangan holda nokaut sichqonlarini yaratish ko'p mehnat talab qiladigan, vaqt talab qiladigan va samarasiz jarayondir. Gomologik rekombinatsiya orqali ES hujayralarini nishonga olish, ximerik sichqonlarni ko'paytirish va keyin ularni geterozigotli sichqonlar bilan chatishtirish gomozigotli nasllarni yaratish uchun bir necha oy va yillar talab etadi. Bir nechta genetik mutatsiyalarga ega sichqonlarni yaratish uchun murakkab chatishtirish talab etiladi. Biroq, CRISPR/Cas9 yordamida ES hujayralarini ablatsiya qilish yoki CRISPR/Cas9 komponentlarini bitta hujayrali urug'lantirilgan tuxumlarga mikroin'ektsiya qilish orqali hosil qilingan sichqonlardan foydalanganda ko'plab muammolar yuzaga keldi. Masalan, o'zgarishlar ko'pincha biallelik lokuslarda sodir bo'ladi va genga xos emas. Yaqinda CRISPR/Cas9 texnologiyasidan foydalangan holda ES hujayralari bir vaqtning o'zida 5 tagacha genga biallelik mutatsiyalarni kiritishi mumkinligi haqida xabar berilgan edi (Nishizono va boshqalar, 2021). Shu maqsadda Cas9 mRNK va beshta genga xos gRNK bir vaqtning o'zida ES hujayralariga transfektsiya qilindi. Bu ushbu protseduraning istiqboli va samaradorligini ta'kidlaydi, garchi bu mutatsiyalar asoschi liniyalari besh karra nokaut sichqonlarini ishlab chiqarish uchun ko'paytirilganda o'tgan bo'lishi mumkin. Tadqiqotda shuningdek, kutilmagan kashfiyot haqida xabar berilgan: ES hujayralari endi genetik modifikatsiyalangan sichqonlarni yaratish uchun talab qilinmaydi. Buning o'rniga, ma'lum gen mahsulotlarini olib tashlash uchun Cas9 mRNA va gRNA bir hujayrali bosqichli embrionlarga kiritildi. Natijada, sichqonlarda genlarni yo'q qilish oqibatlarini o'rganish uchun nazariy jihatdan ishlatilishi mumkin bo'lgan nokaut asoschi liniyalari yaratildi (Qin va boshqalar, 2016). Shunday qilib, CRISPR/Cas9 an'anaviy genetik muhandislikka qaraganda arzonroq narxda TNBC ni davolash uchun transgen sichqonlarni yaratishga imkon beradi. CRISPR/Cas tizimidan foydalanib, TNBC dagi bir yoki bir nechta endogen genlarda nuqta mutatsiyalarini muvaffaqiyatli kirita oladigan yangi nokaut sichqoncha modeli ishlab chiqildi. Ushbu konsepsiyaga asoslanib, TNBC ning hayvon modellari ham BRCA1 va p53 ning CRISPR/Cas9 vositachiligida o'chirilishi yordamida ishlab chiqilishi mumkin, bu esa yurak urish tezligini tiklashning yo'qolishiga, genomik beqarorlikka va mutant fenotiplarga olib keladi (Annunziato va boshqalar, 2020).
Hozirgi vaqtda TNBC ni tashxislash uchun mammografiya, magnit-rezonans tomografiya (MRT) va ultratovush kabi turli usullar qo'llaniladi. Biroq, bu usullarning ba'zi cheklovlari mavjud. Mammografiya saraton hujayralari boshqa organlarga ko'chib o'tgan metastazlar o'rniga mahalliy ko'krak to'qimasini tashxislash uchun ishlatiladi. Ultratovush tekshiruvi TNBC ni tashxislashning ishonchli usuli emas (Chen va Lee-Felker, 2023). MRT ultratovush va mammografiyaga qaraganda yuqori sezuvchanlikka ega, ammo uning diagnostika aniqligi cheklangan (Sha va Chen, 2022). To'qima biopsiyasi saraton hujayralarini aniqlashning invaziv usuli hisoblanadi. Biroq, ba'zi hollarda, agar igna qiziqish doirasidan chetga chiqsa, biopsiya saraton to'qimasini o'tkazib yuborishi mumkin. Bundan tashqari, bu juda qimmat va bemor uchun travmatik bo'lishi mumkin. TNBC turli xil saraton turidir, shuning uchun biopsiya saraton turi haqida etarli ma'lumot bermasligi mumkin. Shuning uchun, TNBC ni aniqlash uchun yangi diagnostik jihatdan ishonchli usul shoshilinch zarur. CRISPR/Cas9 ko'krak bezi saratonini tashxislash uchun juda sezgir va minimal invaziv alternativa bo'lib xizmat qilishi mumkin. Shu maqsadda, TNBC diagnostikasi uchun PCR usullarini takomillashtirish uchun CRISPR/Cas9 asosidagi strategiyalardan foydalanish mumkin. Birinchidan, CRISPR tizimining Cas9 va cpf1 oqsillari o'ziga xos bo'lmagan DNKni olib tashlash uchun ishlatiladi, keyin bu ikki oqsil (Cas9 va cpf1) maqsadli DNKga bog'lanishdan oldin PAM ketma-ketligini taniy oladi (Deepak Singh va boshqalar, 2021). Shunday qilib, PCR saraton rivojlanishi bilan bog'liq mutatsiyalarni aniqlay oladi. Bir nechta tadqiqotlar turli saraton kasalliklarida turli mutatsiyalarni aniqlash uchun ushbu CRISPR asosidagi strategiyani qo'llagan (Safari va boshqalar, 2019). Shunday qilib, CRISPR asosidagi PCR usullari TNBC tashxisining biopsiyaga asoslangan immunohistokimyo kabi invaziv usullarga bog'liqligini kamaytirishi mumkin.
TNBC da gormon retseptorlarini boshqarishdagi genotipik o'zgarishlar ham ko'rsatilgan (Chen va Russo, 2009). Tibbiy yordam nuqtasida diagnostika qilish uchun mikroarraylardan foydalanadigan CRISPR/Cas9 asosidagi PCR strategiyalari ushbu mutatsiyalarni samarali kuzatishi mumkin (Hajian va boshqalar, 2019). Shuningdek, u tibbiyot xodimlariga TNBC bemorlaridagi ma'lum mutatsiyalar haqida tegishli ma'lumotlarni taqdim etishi mumkin, bu ularning davolash kursini yaxshilashga yordam beradi. Biroq, bu kombinatsiyalangan texnikaning cheklovlari mavjud. Shuning uchun, ushbu CRISPR/Cas-PCR usuli TNBC tashxisi uchun sog'liqni saqlashda qo'llanilishidan oldin keng qamrovli tadqiqot ishlari talab etiladi (Yang va boshqalar, 2019).
Nashr vaqti: 2024-yil 14-oktabr